先用標準葡萄糖試劑（可在試劑門市部買到），用蒸餾水配成已知的標準溶液（一般配0.5%、1%、3%、5%、7%五個濃度的溶液即可），分別在分光光度計上（最好465微米處）測定光密度（吸光度）。以光密度為橫坐標，濃度（%）為縱坐標，在坐標紙上標出5個點的坐標值，連接各點，得一條直線，就是所謂“標準曲線”。然后就在光度計上測你的未知葡萄糖溶液的光密度，在標準直線上找到該光密度相對應的濃度值（%），你的工作就完成了。此方法一天可測定100多個葡萄糖樣品。在中國藥典2005二部中測定葡萄糖注射液中葡萄糖含量用旋光法，可以一試：
含量測定: 精密量取本品適量（約相當于葡萄糖10g），置100ml量瓶中，加氫試液0.2ml（10％或10％以下規格的本品可直接取樣測定），用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，依法測定旋光度（附錄Ⅵ E），與2.0852相乘，即得供試量中含有C6H12O6·H2O的重量（g）。
葡萄糖沒有紫外和可見吸收，用分光光度計測定要考慮顯色問題。可以用蒽酮-硫酸法，顯色后在625nm處測定。在中國藥典2005二部中測定葡萄糖注射液中葡萄糖含量用旋光法，可以一試：含量測定: 精密量取本品適量（約相當于葡萄糖10g），置100ml量瓶中，加氫試液0.2ml（10％或10％以下規格的本品可直接取樣測定），用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，依法測定旋光度（附錄Ⅵ E），與2.0852相乘，即得供試量中含有C6H12O6·H2O的重量（g）。 葡萄糖沒有紫外和可見高精度COD多參數分析測定儀吸收，用分光光度計測定要考慮顯色問題。可以用蒽酮-硫酸法，顯色后在625nm處測定。