分光光度光度計計的基本原理及種類分光光度計是理化分析中最常用的儀器。它的基本原理是建立在光與物質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)上,當光子和某一溶液中吸收輻射的物質(zhì)分子相碰撞時,就發(fā)生吸收,測量其吸光度值的大小可反映某種物質(zhì)存在的量的多少。光的吸收程度與濃度有一定的比例關(guān)系,這就是著名的比直定律。該定律成立的必要條件是單色光(單一波長光)照射樣品。為了使該定律具有良好的線性,對測量濃度有一定的范圍要求。也就是吸光度值控制在0.2～0.7之間,并且要求單色光垂直照射樣品,試樣要均勻。一臺性能優(yōu)良的分光光度計,必須有一個高性能的光路系統(tǒng)即單色儀。單色儀有兩類:一類是以玻璃三棱鏡為色散元件組成;另一類是由光柵為色散元件組成。兩種單色儀各有利弊,用石英玻璃做成的單色儀,在紫外光區(qū)有較高的色散率,波長精度較高,分辨率可達0.2nm,但在可見光區(qū)要大于2nm,波長精度不線性,像751G型分光光度計,是由光柵做成的單色儀,在全段波長(200nm～800nm)之間具有相同的波長精度。但目前大部分光柵或分光光度計所用的光柵都是復制光柵,波長精度不太高,如754、722、752型分光光度計,波長精度在±2nm。如制藥廠采用定波長測量,需要強吸收峰,這時就要采用波長精度較高的儀器,否則很難測準最大吸收值,所以儀器的選用要根據(jù)工作要求。近幾年出現(xiàn)了不少帶單片機的分光光度計,數(shù)據(jù)處理和操作功能大大加強,但基本原理沒有變。二 日常維護做好儀器的日常維護保養(yǎng)工作,也是用好一臺儀器的關(guān)鍵。分光光度計是一種高阻儀器,所以怕潮濕,過高的空氣濕度將影響儀器的穩(wěn)定性和電安全性,環(huán)境濕度一般控制在<85%。溫度對儀器也有一定影響,因儀器燈源本身具有熱量。當工作一段時間后,儀器本身溫度會增加,當環(huán)境溫度過高時會嚴重影響儀器讀數(shù)的穩(wěn)定性和使用壽命。實驗室的溫度一般控制在10℃～25℃之間。在日常維護工作中要定期更換儀器的硅膠,定期開機,這樣才能保證儀器的正常使用和測量數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。三 比色器的選用分光光度計的比色皿若選用不當也會給分析工作帶來較大誤差。一般紫外光區(qū)用石英比色皿,可見光區(qū)用玻璃比色皿。石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波長,因為玻璃不透紫外光。使用中的比色皿會受污染,其配套性會變差。所以當發(fā)現(xiàn)配套性變差后要及時清洗,污染嚴重的要用重鉻酸鉀洗液清洗。當兩個比色皿在檢定配套性時其透射比之差小于0.5%透過率時,就要考慮重新配套或更換比色皿。另外,每次裝入比色皿的溶液不要過滿,一般裝2/3即可,并在每次倒溶液時應小心操作,減少對進光面的擦洗次數(shù),以防進光面磨損而影響透過率。分光光度計是計量儀器,必須定期檢定或校準,若經(jīng)修理后必須重新檢定,經(jīng)檢定合格后方可使用。分光光度計常見用途：
核酸的定量、蛋白質(zhì)的直接定量磁力攪拌器（UV法）、比色法蛋白質(zhì)定量、細菌細胞密度（OD 600）。分光光度計常見用途：核酸的定量、蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）、比色法蛋白質(zhì)定量、細菌細胞密度（OD 600）。